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　　以下是 人骨成型蛋白4 (BMP4) ELISA試劑盒 的典型實(shí)驗(yàn)使用說(shuō)明書模板，具體操作請(qǐng)以實(shí)際試劑盒說(shuō)明書為準(zhǔn)(不同廠家可能存在差異)。

　　人骨成型蛋白4 (BMP4) ELISA試劑盒使用說(shuō)明書

　　BS-0024人 骨成型蛋白4(BMP-4)ELISA試劑盒

　　檢測(cè)范圍：通常為 X pg/mL X ng/mL(如 15.61000 pg/mL)

　　樣本類型：血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等

　　一、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備

　　1. 試劑盒組成

　　| 組分 | 規(guī)格(96T) | 保存條件 |

　　| 預(yù)包被抗BMP4微孔板 | 1塊(12條×8孔) | 28℃(干燥) |

　　| BMP4標(biāo)準(zhǔn)品 | 12瓶(凍干粉) | 20℃(復(fù)溶后28℃)|

　　| 檢測(cè)抗體(生物素標(biāo)記)| 1瓶 | 28℃ |

　　| 辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記鏈霉親和素 | 1瓶 | 28℃ |

　　| 洗滌緩沖液(10×) | 1瓶 | 28℃(稀釋后4℃)|

　　| TMB顯色液 | 1瓶 | 避光28℃ |

　　| 終止液(2M H?SO?) | 1瓶 | 室溫 |

　　| 封板膜 | 24張 | 室溫 |

　　2. 自備材料

　　酶標(biāo)儀(450nm波長(zhǎng))

　　移液器及槍頭(建議使用低吸附型)

　　蒸餾水或去離子水(稀釋洗滌液)

　　離心管、EP管

　　恒溫孵育箱(37℃)

　　二、實(shí)驗(yàn)步驟

　　1. 樣本處理

　　血清/血漿：采集后離心(3000rpm, 10min)，避免溶血。

　　細(xì)胞上清：離心去除沉淀，直接檢測(cè)或80℃保存。

　　組織勻漿：PBS或RIPA裂解后離心取上清。

　　2. 標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶與稀釋

　　1. 加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液(通常為1mL)至凍干標(biāo)準(zhǔn)品中，靜置10min混勻(如1000pg/mL)。

　　2. 梯度稀釋至所需濃度(如1000、500、250、125、62.5、31.2、15.6 pg/mL)。

　　3. 檢測(cè)流程

　　1. 加樣：

　　分別加入標(biāo)準(zhǔn)品、待測(cè)樣本(100μL/孔)，空白孔加稀釋液。

　　覆上封板膜，37℃孵育 90分鐘。

　　2. 洗板：

　　棄液體，拍干。

　　每孔加300μL 1×洗滌液，靜置30秒后棄去，重復(fù) 3次。

　　3. 加檢測(cè)抗體：

　　每孔加入生物素化抗BMP4抗體(100μL)，37℃孵育 60分鐘。

　　洗板3次(同步驟2)。

　　4. 加酶結(jié)合物：

　　每孔加入HRP鏈霉親和素(100μL)，37℃避光孵育 30分鐘。

　　洗板5次(避免殘留酶導(dǎo)致背景升高)。

　　5. 顯色：

　　每孔加入TMB顯色液(90μL)，37℃避光反應(yīng) 1520分鐘(顯藍(lán)色)。

　　6. 終止與讀數(shù)：

　　每孔加入終止液(50μL)，顏色變黃。

　　30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀測(cè) 450nm 吸光度(參考波長(zhǎng)630nm)。

　　三、數(shù)據(jù)分析

　　1. 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：

　　以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)(log scale)，OD值為縱坐標(biāo)，擬合4參數(shù)邏輯曲線(4PL)。

　　2. 計(jì)算樣本濃度：

　　根據(jù)曲線方程計(jì)算樣本濃度，超出范圍需稀釋后復(fù)測(cè)。

　　四、注意事項(xiàng)

　　1. 樣本保存：避免反復(fù)凍融(分裝保存)。

　　2. 洗板：洗滌可降低背景，避免孔間交叉污染。

　　3. 顯色時(shí)間：若陽(yáng)性孔顯色過(guò)快，可縮短時(shí)間。

　　4. 安全：終止液為強(qiáng)酸，避免接觸皮膚。

　　五、常見問(wèn)題

　　高背景：洗板不充分/抗體殘留。

　　低信號(hào)：試劑過(guò)期/孵育時(shí)間不足。

　　標(biāo)準(zhǔn)曲線不佳：稀釋誤差或標(biāo)準(zhǔn)品降解。

　　注：具體參數(shù)(孵育時(shí)間、抗體濃度等)請(qǐng)以試劑盒實(shí)際說(shuō)明書為準(zhǔn)!如需進(jìn)一步協(xié)助，請(qǐng)?zhí)峁┢放苹蜇浱?hào)。以上說(shuō)明書僅供參考，具體請(qǐng)咨詢技術(shù)老師或供應(yīng)商。

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